犬腺状病毒灭活检测项介绍

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狂犬病病毒糖/核等结构蛋白的重组CAVⅡ型病毒的免疫原性

1．在 MDCK细胞上大量制备狂犬病病毒糖/核等结构蛋白的重组犬2型腺病毒，测定TCIDso。以无免疫史的家犬为受试动物，每条犬肌肉注射0.2ml TCIDs.为10°的重组病毒;同时以犬2型腺病毒疫苗株免疫犬作为对照组。

2．免疫后1周开始每隔1周采集和分离免疫犬及对照犬血清一次。

3．采用间接ELISA方法，即以纯化的狂犬病病毒作为抗原包被酶标板，待检免疫犬血清与之反应，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗犬二抗结合并显色。结果表明，重组病毒免疫后狂犬病病毒（糖/核等结构蛋白）特异性抗体显著升高。

4．采集核蛋白重组苗免疫后4周犬的抗凝血液，按2×0.1ml分装入2个离心管中，加入红细胞裂解液，感作后离心，沉淀用0.2mlPBS 悬浮，将FITC标记的羊抗犬CD4+和 CD8+抗血清分别与PBS悬浮的白细胞4℃感作1h，经 PBS洗涤⒉次后悬浮进行FACS检测。结果表明,免疫犬CD4+数量较对照组显著增高，CD4+/CD8+比值显著增加。说明，重组苗中核蛋白诱导了水平较高的细胞免疫。

狂犬病病毒糖/核等结构蛋白的重组CAVⅡ型病毒诱导产生抗体的中和试验作用及免疫保护作用

取前一试验中对照组及免疫组犬血清各100 u l,各与35 LDa狂犬病强毒CVS细胞毒混合，室温孵育3h后，后肢皮下注射BALB/c乳鼠各40只，每只10ul，观察4周。结果显示，与对照组犬血清共孵育的CVS造成全部40只乳鼠发病死亡，而重组病毒免疫犬血清孵育组无发病致死。说明该重组CAV-2诱发机体产生的糖/核等结构蛋白抗体具有显著的中和作用。

从以上结果可以得出，本发明的积极效果在于重组病毒是通过将携带狂犬病病毒糖/核等结构蛋白表达盒的重组全基因组 DNA 序列转染犬⒉型腺病毒E3区易感细胞（即MDCK 细胞系）中获得的。其无需进行大量复杂的病毒分离、鉴定和纯化工作。同时本重组疫苗除了具有犬2型腺病毒的生物学和免疫学特征以外，还展现了狂犬病病毒糖蛋白或核蛋白的免疫学特性，即除了可刺激机体产生针对犬腺病毒的免疫力以外，还可产生针对狂犬病病毒的免疫力，实现了外源基因的持续稳定表达。

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